رسپتور فاکتور رشد اپیدرمال (EGFR)[1] از اعضای خانواده ی رسپتور های تیروزین کینازی بوده که در سطح سلول های اپیدرمال بیان می شود. EGFR نقش کلیدی در انتقال پیام سلولی در راستای افزایش رشد و تکثیر سلولی را دارد. افزایش بیان این فاکتور در بسیاری از انواع سرطان ها مانند سرطان ریه و گلیوبلاستوما[2] مولتی فرم مشاهده می شود. همچنین گزارش ها حاکی از ارتباط بین بیان خارج از کنترل این ژن با سطوح خطرناک تر سرطان و روند بدخیمی آن می باشد. کیت RTP EGFR موتاسیون های شایع ژن EGFR از جمله T907M و C797S که مرتبط با ایجاد مقاومت با مراحل اول، دوم و سوم درمان با مهارکننده های تیروزین کینازی هستند را شناسایی می کند. شناسایی موتاسیون های سوماتیکی در ژن EGFR یک راهکار موثر برای پیش بینی پاسخ های سلولی به مهارکننده های تیروزین کینازی در راستای افزایش بقا بیماران مبتلا به سرطان ریه تحت درمان هدفمند می باشد.
دامنه کاربرد
کیت RTP EGFR یک کیت تشخیصی جهت شناسایی کیفی 32 جهش سوماتیکی در اگزون های 18و19و20 و 21 ژن
(19-Del- T790M- S768I- L858R- Ex20ins- G719x- L861Q- L858R) می باشد. نتایج حاصل از این کیت کمک شایانی به پزشک در شناسایی بیماران مبتلا به سرطان ریه و پاسخ مثبت آنان به درمان با مهارکننده های تیروزین کینازی می نماید.
مبنای واکنش
کیت بر پایه تکثیر اختصاصی توالی جهش یافته معین در نمونه های شامل ترکیبی از آلل وحشی و موتانت مورد نظر، از طریق ARMS PCR[3] طراحی شده است که امکان تکثیر انتخابی آلل های جهش یافته و نرمال را فراهم می کند. تکثیر انتخابی به دلیل عدم تطابق ایجاد شده برای پرایمرها اتفاق می افتد. ایجاد عدم تطابق در انتهای ۳‘پرایمر، دمای اتصال به نقطه هدف (Annealing) را برای آلل مورد تظر تغییر می‌دهد. از آنجایی که Taq DNA پلیمراز قادر به انجام فعالیت اگزونوکلئاز نیست، در صورت عدم تطابق سنتز رخ نمی دهد. دقت طراحی پرایمرها سبب می گردد تا مقادیر بسیار اندک موتانت در نمونه هایی که اکثریت توالی غیر جهش یافته هستند قابل شناسایی باشد.
*پروب DNA مورد استفاده برای تشخیص تکثیر موتانت EGFR در فلوفور FAM و ROX می باشد.
*برای تشخیص محصول واکنش PCR ژن رفرانس از رنگ فلورسنت Hex استفاده شده است.
ویژگی های کاربردی
- تکثیر انتخابی موتانت EGFR از طریق .ARMS PCR
- قابلیت تشخیص 32جهش مختلف در اگزون 18، 19، 20 و 21 در یک تست.
- واکنش بصورت مولتیپلکس در 5 ویال طراحی شده است.
- دارا حساسیت بالینی تا 0.2٪ جهش در ژن EGFR در 3-5 نانوگرم DNA استخراج شده.
- کیت تشخیصیRTP EGFR دارای سرعت بالا، کارآیی آسان برای کاربر می باشد و با انواع دستگاه های Real -Time PCR موجود در بازار سازگار می باشد.
شرایط نگهداری کیت
| دمای نگهداری | دمای -15 تا -20 درجه ی سانتی گراد |
| حساسیت به نور و دما | محلول پرایمر و پروب ها به نور حساس هستند. |
| تعداد دفعات ذوب | اجزای کیت قابلیت سه مرتبه متوالی ذوب و انجماد را دارند. از ذوب و انجماد محلول ها بیش از سه مرتبه جدا خودداری کنید. |
| تاریخ انقضا | از زمان تولید به مدت 12 ماه |
کمترین حد شناسایی (LOD)
کمترین حد شناسایی به معنای کوچکترین مقدار نشانگر هدف می باشد که می تواند دقیقاً شناسایی شود. LOD کیت EGFR به عنوان کمترین مقدار DNA جهش یافته در پس‌زمینه DNA نوع وحشی تعریف می‌شود که در آن یک نمونه جهش یافته نتایج مثبت جهش را در 95٪ آزمایش‌ها ارائه می‌دهد. کمترین حد شناسایی موتاسیون برای این کیت برابر با 1% معادل 5 میکروگرم می باشد.
مشخصات
ویژگی های کیت RTP EGFR به صورت اختصاری در جدول زیر ارائه شده است:
| توضیحات | |
| روش مورد استفاده | ARMS PCR |
| نوع نمونه | بافت توموری |
| تعداد جهش مورد شناسایی | 32 جهش مختلف در اگزون 18، 19، 20 و 21 |
| مدت زمان انجام واکنش | 90 دقیقه |
| تعداد تست | 24 تست |
[1] Epidermal Growth Factor Receptor
[2] Glioblastoma
[3] Amplification Refractory Mutation System PCR
