پشتیبانی فنی الایزا
بصورت کلی خطاهای رایج در تکنیک الایزا به 2 دسته کلی تقسیم می شوند:
- نکات قبل از شروع تست الایزا
- عوامل حین انجام تست الایزا
نکات و عوامل قبل از انجام آزمایش
- محکم بستن و یا طولانی بسته بودن گارو در زمان نمونه گیری
- تاثیر ضد انعقاد ها هنگام استفاده از پلاسما ( – EDTA اثر روی آنزیم آلکالین فسفاتاز )
- نمونه همولیز(افزایش – Hb و باقی ماندن آن در محیط بعداز شستشو در سنجش هایی که از آنزیم پراکسیداز استفاده میشود تداخل ایجاد میکند )
- نمونه لیپمیک باعث کدر شدن و شیری شدن سرم میشود .
- نمونه ایکتریک ( سرم زرد تیره بیلی روبین بعنوان دترژنت عمل کرده واکنش با قسمتهای هیدروفوب آنتی ژن و آنتی بادی)
- تاثیر مواد نگهدارنده (اثر سدیم آزاید روی آنزیمهای پراکسیداز )
عوامل حين انجام آزمایش
- مقادیر بالای کنترل منفی و یا ایجاد زمینه در میکروپلیت
- مقادیر پایین کنترل مثبت یا جذب نوری پایین
- تمام پلیت مثبت تفسیر شود و در تمام چاهکها محلول دارای رنگ است
- واکنش مثبت کاذب
- قدرت تکرار پذیری ضعیف یا عدم هماهنگی در جذب نوری دو چاهک دارای نمونه یکسان
- حساسیت ضعیف
- جذب نوری بالا استانداردها و یا کنترل منفی
- نمونه با جذب نوری خارج از محدوده استانداردها
- جذب نوری پایین نمونه ها ، کنترل ها و استانداردها
- کنترل مثبت یا منفی خارج از محدوده تعیین شده توسط بروشور کیت
- خروج استریپ ها از قاب نگهدارنده آنها
- تغییر رنگ کروموژن
- تغییر رنگ مخلوط کروموژن و سوبسترا قبل از افزودن به محیط واکنش
- تغییر رنگ محلول متوقف کننده واکنش
عدم بروز واکنش رنگی در میکروپلیت پس از افزودن سوبسترا و انکوباسیون آن
دلایل احتمالی | تصحيح ایراد |
آلوده شدن چاهک های کنترل منفی با کنترل مثبت | در هنگام شستشو از سر ریز شدن محلول شستشو از چاهکهای پلیت به یکدیگر اجتناب کنید |
آلوده شدن ویال کنترل منفی | همیشه ابتدا کنترل منفی را در چاهکها ریخته و بعد کنترل مثبت را بریزید برای هر نمونه برداری از نوک سمپلر جدید استفاده کنید توجه داشته باشید که نوک سمپلر به اندازه کافی بلند باشد تا نمونه ها با انتهای لوله سمپلرتماس پیدا نکند تست را با مواد کیت تازه تکرار کنید. |
شستشوی ناکافی و یا آلوده شدن کنترل منفی با آنزیم کنژوگه | در هنگام شستشو مطمئن شوید که تمامی باقیمانده های آنزیم کنژوگه از چاهک ها خارج شده اند تمامی نمونه ها و مواد را در مرکز کف چاهک ها بریزید و از تماس نوک سمپلر با دیواره و لبه چاهک ها بپرهیزید. |
دلایل احتمالی | تصحيح ایراد |
در زمان تست مواد داخل کیت به دمای اتاق رسانده نشده اند
| مطمئن شوید که تمامی اجزای کیت به دمای اتاق رسیده اند |
مقدار نمونه کمتر از مقدار لازم است | مطمئن شوید که نوک سمپلرها خوب و محکم فیت شده اند لوله سمپلرها را چک کنید تا گرفته نشده باشندکالیبراسیون سمپلرها را چک کنید و در صورت عدم کالیبره بودن آنها باید کالیبره شوند |
محلول کروموژن سوبسترا بدرستی تهیه نشده است | محلول کروموژن سوبسترا را درست قبل ازاستفاده آماده کنید طرز تهیه محلول کروموژن سوبسترا را دربروشور مطالعه کرده و به آن عمل کنید |
آلودگی سوبسترا به اسید و یا آلودگی کنترل مثبت به باکتری | مجدداً تست را با یک کیت جدید تکرار کنید |
زمان انکوباسیون خیلی کوتاه است | دقت در زمان انکوباسیون |
ورود رطوبت به کیسه حاوی پلیت | عملکرد صحیح نم گیر داخل کیسه پلیت را بررسی کنید استریپهائی که مصرف نمی شوند را درکیسه قرارداده و در آن را محکم ببندید |
دمای نامناسب در مدت انکوباسیون دمای اتاق برای انکوباسیون سوبسترا خیلی پائین است | بررسی دمای انکوباتور یا اتاق بررسی دمای اتاق |
خشک شدن چاهکها در خلال انجام تست | انجام تمام مراحل تست بدون وقفه |
افزودن ناکافی آنزیم کنژوگه غلیظ به محلول رقیق کننده برای ایجاد محلول آماده کار | کنژوگه را دوباره با صحت کامل تهیه کنید. ( از قبل محاسبات راانجام دهید) |
دلایل احتمالی | تصحيح ایراد |
استفاده از حجم کم محلول شستشو و واکنش سوبسترا با ذرات باقی مانده آنزیم کونژوگه | پر کردن چاهکها هنگام شستشو |
محلول سوبسترا با کونژوگه آلوده است | بررسی لوله سمپلر ازنظر وجود ذرات مایع یا خشک شده. نوک سمپلر به حد کافی بلند باشد که مایع با انتهای لوله سمپلر تماس پیدا نکند |
ظرف محتوی سوبسترا آلوده و کثیف است | ظروف را قبل از استفاده چک کنید |
در خلال انکوباسیون سوبسترا پلیت در مقابل نور قرارگرفته | پس از ریختن محلول سوبسترا پلیت را در تاریکی قرار دهید |
دلایل احتمالی | تصحيح ایراد |
شستشوی نا کافی یا مسدود شدن کانالهای واشر الایزا | 1) اطمینان از صحت عملکرد واشرالایزا 2) انجام کالیبراسیون و تعمیرات روتین |
وجود گلبولهای قرمز در نمونه | نمونه را قبل از استفاده سانتریفوژ نمائید |
تبخیر نمونه آنزیم کونژوگه در خلال انکوباسیون 37 درجه | پلیت را با برچسب مخصوص بپوشانید |
دمای انکوباسیون بالا | دمای اتاق یا انکوباتور را چک کرده و در میزان مورد نظر کالیبره کنید |
آلوده شدن چاهکها با آنزیم کنژوگه | آنزیم کنژوگه را با دقت در مرکز کف چاهکها اضافه نموده و از تماس نوک سمپلر با دیواره ها و لبه های چاهکها بپرهیزید |
آلوده شدن سوبسترا به آنزیم کنژوگه | بازرسی لوله سمپلر ازنظر عدم وجود ذرات مایع یا خشک شده خارجی و استفاده از نوک سمپلر بلند |
غلظت بالای آنزیم کنژوگه در محلول رقیق کننده | از روی دستور کار کیت یک محلول کنژوگه آماده کار تازه بسازید |
دلایل احتمالی | تصحيح ایراد |
اشتباه در تقسیم مواد و نمونه ها | دستگاه دیسپنسور را چک نمائید ( اگر دستگاه الایزا اتوماتیک دارید) |
وجود حباب در چاهکها | برای از بین بردن حبابها از سوزن استفاده کنید ) برای هر چاهک از یک سوزن(یا با ضربه زدن به پلیت حباب را بترکانید |
اثر انگشت بر روی پلیت | با محلول شستشو یا پنه تمیز اثر انگشت را پاک کرده و سپس پلیت را خشک کنید |
تکنیک شستشوی ضعیف یا غلط | هرچاهک را کاملا با محلول شستشو پر کنید ؛ محلول شستشو سر ریز نشود ، پس از خالی کردن محلول شستشو، پلیت را خوب خشک کنید |
دلایل احتمالی | تصحيح ایراد |
در تهیه آنزیم کنژوگه آماده کار از مقدار مناسب و کافی آنزیم کنژوگه غلیظ در محلول رقیق کننده آن استفاده نشده | تهیه محلول آماده کار تازه با استفاده از بروشور ( حتما از قبل محاسبات را انجام دهید) |
اشتباه در سمپلینگ آنزیم کنژوگه آماده کار | کالیبراسیون سمپلرها را چک کنید |
زمان انکوباسیون ناکافی دما مناسب نیست یا پلیت بعد از انکوباسیون اول مدت زیادی باقی مانده تا عملیات بعد روی آن صورت گیرد | تکرار تست با زمان انکوباسیون مناسب انجام تست طبق بروشور و بدون وقفه های اضافی |
دلایل احتمالی | تصحيح ایراد |
پلیت بعد از انکوباسیون اول مدت زیادی در دمای بالاتر از آنچه سازنده کیت سفارش کرده باقی مانده تا عملیات بعد روی آن صورت گیرد | تست را طبق دستور بروشور و بدون وقفه های اضافی انجام دهید |
مقادیر کافی از نمونه ها در چاهک ها ریخته نشده | کالیبراسون سمپلرها را بررسی کنید |
دلایل احتمالی | تصحيح ایراد |
غلظت در نمونه بسیار بالاست | نمونه را با کالیبراتور صفر رقیق کرده و تست را تکرار کنید |
دلایل احتمالی | تصحيح ایراد |
دمای اتاق زیر 20 درجه سانتی گراد است | حفظ دمای آزمایشگاه بین 20 تا 2۵ درجه |
دلایل احتمالی | تصحيح ایراد |
آلودگی کنترل | تکرار تست با کنترل جدید |
آلودگی کالیبراتورها | تکرار تست با کالیبراتورهای جدید |
دلایل احتمالی | تصحيح ایراد |
آلودگی کروموژن | استفاده از کروموژن تازه |
دلایل احتمالی | تصحيح ایراد |
آلودگی کروموژن و سوبسترا | استفاده از کروموژن وسوبسترای تازه |
دلایل احتمالی | تصحيح ایراد |
آلودگی محلول متوقف کننده | استفاده از محلول متوقف کننده تازه |
دلایل احتمالی | تصحيح ایراد |
طولانی شدن زمان واکنش آنزیم کنژوگه و سوبسترا | رعایت زمان توصیه شده واکنش آنزیم کنژوگه و سوبسترا |
بله، تمامی کمپانی های تولید کننده کیت برای تطابق اجزا کیت ساخته شده ی خودشان چندین کد و شماره ی لات در نظر گرفته اند. به عنوان مثال یکی از راه های تطابق دادن این اجزا در کیت های برند GBC این است که شماره ی ID No روی لیبل هر جز کیت ( پلیت یا محلول ها) را با جدول مشخصات کیت در بروشور( روش کار) کیت مقایسه کنند و تطبیق دهید.
