مجموعه مولکول اصلی کمپلکس سازگاری بافتی [1] (MHC) به عنوان کمپلکس آنتی ژن لکوسیت های انسانی[2](HLA) شناخته می شوند. HLA ها از گروه خاصی از مولکول هایی که بر سطح سلول بیان شده اند، تشکیل می شوند که برای شناسایی مولکول های غیرخودی از خودی توسط سیستم ایمنی نقش بسیار مهمی ایفا می کنند.
گزارشات متعددی مبتنی بـر وجـود ارتبـاط بین برخی از انـواع HLA ها و تعـدادی از بیمـاری هـا وجـود دارنـد و براساس آنها، یکی از قویترین این ارتباطات، ارتباط بـین HLA-B27 و اسپوندیلوآرتوپاتی ها[3]، بخصوص اسـپوندیلیت آنکیلوزانت[4] 3(AS)، می باشـد. اسپوندیلیت آنکیلوزان نوعی از آرتریت می باشد که التهاب مزمن ستون فقرات و مفاصل ساکروایلیاک[5] (ساکروایلئیت) از علائم آن است.
دامنه کاربرد
شناسایی HLA-B27 به تأیید تشخیص موارد مشکوک به اسپوندیلیت آنکیلوزان ، آرتریت واکنشی ، آرتریت روماتوئید نوجوانان کمک می کند.
مبنای واکنش
اساس کیت HLA-B27 ، تکنیکPCR Real-Time می باشد که مبتنی بر تقویت و تکثیر ناحیه ژن آللی توسط پرایمر و پروب های مخصوص HLA-B27 است. مخلوط PCR حاوی پروب های خاص شامل رنگ های فلورسنت گزارشگر و خاموش کننده است. پس از هیبرید شدن به دنباله قطعه ی هدف، پروب ها فعال می شوند و در نتیجه فعال سازی فلورسانس، متناسب با تقویت توالی هدف افزایش می یابد. شدت فلورسانس در هر چرخه واکنش با واحد جمعآوری دادههای سیکل حرارتی Real-time PCR اندازهگیری میشود و با نرم افزار ارائه شده مورد تجزیه و تحلیل قرار می گیرد.
- پروب DNA مورد استفاده برای تشخیص تکثیر محصول HLA-B27 فلوفور FAM می باشد.
- برای تشخیص محصول واکنش PCR کنترل داخلی (IC) ازرنگ فلورسنت Hex استفاده شده است.
ویژگی های کاربردی
- روش Real -Time PCR روشی بسیار دقیق است و به عنوان “استاندارد طلایی” در نظر گرفته میشود.
- یکی از مهم ترین ویژگی های کیت تشخیصی تولید شرکت رادمان تشخیص، شناسایی 174 آلل HLA-B27 می باشد.
- واکنش بصورت مولتیپلکس طراحی شده است و وجود یک کنترل داخلی در واکنش از ایجاد نتایج منفی کاذب جلوگیری میکند.
- کیت تشخیصی HLA-B27 دارای سرعت بالا، کارآیی آسان برای کاربر می باشد و با انواع دستگاه های Real -Time PCR موجود در بازار سازگار می باشد.
شرایط نگهداری کیت
دمای نگهداری | دمای -15 تا -20 درجه ی سانتی گراد |
حساسیت به نور و دما | محلول پرایمر و پروب ها به نور حساس هستند. |
تعداد دفعات ذوب | اجزای کیت قابلیت سه مرتبه متوالی ذوب و انجماد را دارند. از ذوب و انجماد محلول ها بیش از سه مرتبه جدا خودداری کنید. |
تاریخ انقضا | از زمان تولید به مدت 12 ماه |
کمترین حد شناسایی (LOD)
کمترین حد شناسایی به معنای کوچکترین مقدار نشانگر هدف می باشد که می تواند دقیقاً شناسایی شود. کم ترین حد تشخیص، کمترین مقدار اسید نوکلئیک در یک نمونه است که میتوان آن را تشخیص داد. کیت HLA-B27 RTP توانایی تشخیص تکرارپذیر حضور HLA-B27 را در سطح بیش از 10 کپی/ بیماران اسپوندیلیت آنکیلوزان (AS) نشان می دهد.
اختصاصیت تست
با هیچ کدام از عوامل بیماری زایی که در جدول زیر آمده است، واکنش متقاطعی (Cross reactivity) دیده نشد.
Microorganism | |
Hepatitis A virus | Acinebacter baumannii |
Haemophilusinfluenzae | Aeromonas hydrophilia |
Respiratory Syncytial Virus | Bacillussubtilis |
Escherichia coli | Campylobacter coli |
Enterococcusfaecalis | Candida albicans |
Hepatitis C Virus | Hepatitis B Virus |
Human parvovirus B19 | HIV |
Klebsiella pneumoniae | Klebsiella oxytoca |
Norovirus GI | Neisseria gonorrhoeae |
Pseudomonas aeruginosa | Norovirus GII |
Staphylococcus aureus | Salmonella typhi |
Streptococcus pneumoniae | Staphylococcus epidermidis |
Vaccinia virus | Streptococcus pyogens |
Vibrio cholera |
مشخصات
ویژگی های کیت RTP HLA-B27 به صورت اختصاری در جدول زیر ارائه شده است:
توضیحات | |
روش مورد استفاده | Real-Time PCR |
نوع نمونه | خون و مغز استخوان |
آلل های مورد شناسایی | B*27:01- B*27:174 |
مدت زمان انجام واکنش | 70 دقیقه |
تعداد تست | 48 تست |
[1] Major histocompatibility complex
[2] Humna leukocyte antigene
[3] Spondyloarthropathy
[4] Ankylosing spondylitis
[5] Sacroiliac